【正确答案】分子克隆的基本步骤包括: (1)分离制备待克隆的DNA片段 ①用限制性核酸内切酶将DNA切成一定大小的DNA片段; ②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段; ③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下,用人工方法合成对应的基因片段; ④从mRNA反转录产生cDNA。 (2)克隆基因载体的选择与构建 克隆载体可以选择质粒、噬菌体DNA、柯斯质粒等。 (3)重组DNA分子的构建 使DNA分子与载体分子连接成重组DNA分子,分为4种不同的情况:黏性末端连接、平头末端连接、同聚寡核苷酸末端连接以及人工接头分子连接。 (4)重组DNA分子导入受体细胞 重组DNA分子导入受体细胞常采用转化或转染、转导的方法。 (5)重组克隆的筛选和鉴别 采用直接筛选、间接筛选、核酸杂交以及免疫学方法对重组克隆进行筛选和鉴别。
【答案解析】