【正确答案】(1)蛋白质免疫印迹的概念 蛋白质免疫印迹又称免疫印迹，是在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定基础上发展起来的，根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中某种蛋白质的技术。该技术的灵敏度很高，是分子生物学中最常用的蛋白质研究技术，为检测样品中是否存在蛋白抗原提供了一种可靠的方法。 (2)蛋白质免疫印迹的作用原理 被测蛋白只能与标记的特异性抗体相结合，而这种结合不改变该蛋白在凝胶电泳中的相对分子质量。经SDS-PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，封闭固相载体未反应的位点。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影检测被测蛋白。 (3)蛋白质免疫印迹的操作步骤 ①蛋白样品的制备：提取细胞或组织蛋白，测定蛋白浓度，将蛋白变性。 ②SDS-PAGE电泳分离样品。 ③转膜与封闭：将已分离的蛋白转移到尼龙或其他膜上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附。 ④与一抗杂交：用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体(一抗)结合。 ⑤与二抗杂交：洗去未结合的一抗，加入酶偶联或放射性同位素标记的二抗。 ⑥显色：通过显色或放射自显影法检测凝胶中的蛋白成分。