问答题 克隆到一个新基因,与癌症发生有关,请设计实验确认是属于原癌基因还是抑癌基,并说明理由。
【正确答案】(1)外源DNA分子(所克隆到的新基因)与载体DNA分子的体外重组连接:相同的限制性内切酶使外源DNA分子与载体DNA分子产生相同的粘性末端,用DNA连接酶可将两者连接起来。如将目的DNA片段与质粒、病毒或者噬菌体等核苷酸序列连接。
   (2)重组DNA分子扩增:随着扩增细胞的生长、增殖,重组DNA分子也复制扩增,这一过程即为无性繁殖或克隆。
   (3)将载体转入受体细胞表达(同时转入非肿瘤细胞和肿瘤细胞),并筛选含有重组DNA分子的受体细胞。
   (4)癌基因是正常细胞增殖过程中的正性调控基因,其突变激活引起正常细胞癌变。抑癌基因是正常细胞增殖过程中的负性调控基因,抑癌基因编码的蛋白抑制细胞增殖,使细胞停留于检验点上阻止周期进程,其失活导致细胞癌变。检测非肿瘤受体细胞的具有下列特征即为癌变,同理肿瘤细胞失去下列特征或下列特征减弱,所转入基因即为抑癌基因:①细胞生长与分裂失去控制,具有无限增殖能力。②侵润性、侵袭性和扩散性(细胞间黏着性;在分化程度上癌细胞低于良性肿瘤细胞;失去了许多原组织细胞的结构和功能)。③细胞间相互作用改变(识别改变;表达水解酶类;表面抗原)。④mRNA的表达谱及蛋白表达谱系或蛋白活性改变(少数基因表达不同、突变位点不同表型;多变胚胎细胞蛋白、端粒酶活性升高)。⑤染色体非整倍性。
【答案解析】