Synaptobrevin 是存在于突触小泡上的一种蛋白质，而 Synataxin 和 Snap-25则存在于神经元细胞膜上，三者相互作用介导突触小泡与细胞膜接触并融合，将神经递质释放到突触间隙。从而完成神经递质的分泌。 在 2001 年的一篇报道中，研究人员发现存在于细胞质中的 Synaphin 可与 Synataxin 相互作用， 为了确定Synaptobrevin 及 Snap-25 是否会影响 Synaphin 与 Synataxin 之间的相互作用，研究人员使用了 GST-pull down 技术进行了验证。
首先将纯化的 GST-Synaphin 与不同浓度的 Synataxin 混合， 然后再分别加入一定量的 Synaptobrevin 和 Snap-25， 或同时加入 Synaptobrevin 和 Snap-25，最后又加入了 Glutathione-Sepharose beads, 反应一段时间后离心收集沉淀，用 Western blotting 检测 Synataxin。
1）简述 GST-pull down 的实验原理。
2）根据实验结果， 能否确定在 Synataxin存在下， Synaphin是否与 Synaptobrevin或 Snap-25 结合？ 为什么？
1）CST-pull down 的基本原理是将靶蛋白-GST (谷胱甘肽巯基转移酶)融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白)，洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白。
2）能。GST Synaphin与Synataxin结合，再分别加入一定量的Synaptobrevin和Snap-25，若Western blotting结果显示有Synaptobrevin和Snap-25。