问答题
利用“硫酸铵”常可将蛋白质初步分离。请写出这种方法或技术的名称;采用何种方法或技术可将初步分离的蛋白质制品中硫酸铵去除?简要叙述其原理;写出任意2个可进一步利用硫酸铵获得的蛋白质粗制品纯化的方法名称。
【正确答案】利用“硫酸铵”初步分离蛋白质的方法称为盐析法。常采用凝胶过滤层析去除蛋白质制品中的硫酸铵,其原理:凝胶过滤树脂颗粒呈多孔状结构,在层析过程中,蛋白质小分子能进入树脂颗粒的孔,因而路径长,后洗脱出来;较大的蛋白质分子不能进入孔,路径短,先洗脱出来。
进一步纯化硫酸铵获得的蛋白质粗制品的方法有:
①SDS-PAGE:带电颗粒在电场中移动的现象称为电泳,其速度主要起决于所带电荷的性质、数目、颗粒的大小和形状等。SDS-PAGE是实验室常用的测定蛋白质分子量的简便方法。SDS(十二烷基硫酸钠)是一种阴离子洗涤剂,能破坏活性蛋白质中的非共价键从而使蛋白质变性。SDS和变性蛋白质复合物带有大量负电荷,基本上消除了蛋白质分子之间在电荷和形状方面的差异,使多肽链的大小成为决定其泳动速度的惟一因素。
②离子交换层析:离子交换层析利用蛋白质的两性解离特性分离纯化蛋白质。阳离子交换剂在pH7.0时,带有稳定的负电荷,可与蛋白质的阳离子结合。阴离子交换剂在pH7.0时,带有稳定的正电荷,可与蛋白质的阴离子结合。当被分离的蛋白质溶液流经离子交换剂柱时,带有相反电荷的蛋白质可因离子交换而吸附于柱上,随后又可被带同样性质电荷的离子所置换而被洗脱。
【答案解析】