问答题
(中山大学2009年考研试题)假如你从某一动物组织提取一份总RNA样品,可采用一些什么方法检测它的质量(完整性)、纯度和浓度?并说明判断的依据。
【正确答案】正确答案:(1)RNA样品质量(完整性)的检测方法。可以采用琼脂糖凝胶电泳检测,从电泳凝胶上不仅可以判断RNA的完整性和降解程度,也可以判断有无DNA、蛋白质和多糖的污染。 出现的电泳条带有两条,是两条最大的核糖体RNA(rRNA)分子,即18S和28S rRNA,较小的RNA也很丰富但看不到,因为太小,跑出了凝胶的边界。多数细胞中的信使RNA(mRNA)经EB染色后不足以形成可见的带。只要18S和28S rRNA带亮,且28S rRNA大约为18S rRNA的两倍,说明提取的RNA没有发生降解,纯度好。 (2)RNA样品的纯度和浓度的检测方法。可以采用紫外分光光度计测定样品的OD
260
/OD
280
值。吸光度比值大小直接反映多糖、多酚和蛋白质的污染程度。 纯度分析:纯净的RNA样品其OD
260
/OD
280
的比值应介于1.7~2.0,小于此比值说明有蛋白或苯酚污染,如果比值大于2.0则可能被亚硫氢胍及巯基乙醇污染。 浓度计算:对于单链RNA,OD
260
=1.0时,RNA浓度为40μg/ml,按照上述稀释方式,即OD
260
=0.1时,其RNA浓度为1μg/ml。所以,浓度(ng/μl)=OD
260
×n(稀释倍数)×40。
【答案解析】