【正确答案】加热DNA的稀盐溶液,达到一定温度后,260nm的吸光值骤然增加,表明两链开始分开,吸光度增加约40/%后,变化趋于平坦,说明两链已完全分开。这表明DNA变性是个骤变过程,类似结晶的熔解。因此,将260nm波长下吸光值的增加量达最大增量一半时的温度称DNA的熔解温度(Tm)。
影响Tm值的因素:(1)DNA的均一性:一是指DNA分子中碱基组成的均一性;二是指待测样品DNA的组成是否均一。
(2)G—C对含量:G~C对含3对氢键,A—T对含2对氢键,故G—C对相对含量愈高,Tm亦高。经验公式为:(G+C)/%=(Tm-69.3)×2.44。
(3)溶液的离子强度:离子强度较低的介质中,Tm较低。
(4)溶液的pH值:高pH下碱基广泛去质子而丧失形成氢键的能力,pH值大于11.3时,DNA完全变性。pH值低于5.0,DNA易脱嘌呤。
(5)变性剂:甲酰胺、尿素、甲醛等可破坏氢键,妨碍碱基堆积,使Tm值下降。
【答案解析】