问答题 在进行遗传重组和基因克隆与表达研究中,对分子克隆的载体与宿主系统的选择有非常重要的作用。请论述各主要载体系统的特点及其宿主系统。
【正确答案】进行遗传重组和基因克隆与表达研究中常用的载体主要分为克隆载体和表达载体两大类。所有的载体都必须具有复制起点和多克隆位点。克隆载体以大量繁殖DNA片段为目的,这种载体一般较小,在细胞内拷贝数较高,大部分具有抗生素抗性基因,可以通过抗生素抗性进行阳性克隆的筛选。表达载体是用来将外源基因在宿主细胞内表达成蛋白的载体,其特点是:具有很强的启动子,能为宿主的RNA聚合酶所识别;具有很强的终止子,使得RNA聚合酶全力转录目的基因,同时得到的mRNA较稳定;启动子必须受到控制,只有在诱导条件下才能进行转录;所产生的mRNA必须有翻译起始信号。原核表达系统:将外源基因引入原核细胞,并使其在原核细胞中以发酵形式快速高效地表达、合成基因产物的体系。适用于在原核细胞中表达外源基因的载体。没有转录后加工系统,不能识别、剪除内含子;缺乏翻译后加工系统,不能对翻译的蛋白质进一步修饰加工。真核表达系统:使外源基因在真核细胞中表达的体系。常见的有酵母表达系统,哺乳动物细胞表达系统和昆虫细胞表达系统。具转录后加工系统,具翻译后修饰系统,可实现真正的分泌表达。
【答案解析】