(1)鞭毛(flagellum)的定义
鞭毛是指生长在某些细菌体表的长丝状、波曲形的蛋白质附属物,其数目为一至数十根,具有运动功能。
(2)判断细菌是否有鞭毛方法如下:
①用固体培养基培养细菌,菌落边缘不整齐的为有鞭毛的细菌。
②用半固体培养基培养,一段时间后发现有细菌移动的轨迹,即接种点周围有放射状的痕迹,说明该菌含有鞭毛。
(3)细菌鞭毛丝的延长方式
鞭毛在细胞质内靠近鞭毛基体的核糖体上合成,由鞭毛基部通过中央孔道输送到鞭毛的游离端进行自装配。因此,鞭毛生长方式是其顶部延伸而非基部延伸。
(4)证实鞭毛丝的延长方式的实验
①设计一:将鞭毛蛋白标记荧光标记,随后直接观察的方法
a.将鞭毛基部和鞭毛蛋白用不同的荧光素标记,例如NHS酯类的Cy3和Cy5。
b.在细胞外设定好鞭毛组装的条件。
c.用荧光显微镜在外界荧光源激发小分子荧光的条件下观察鞭毛的组装。
结论:若荧光沿着鞭毛顶部走,则说明鞭毛生长方式是沿着其顶部延伸的。
②设计二:将鞭毛顶部用抗体封闭,观察鞭毛是否延伸的方法
a.光学显微镜应该能够看到一些大的鞭毛,如果能够看到的话,可以用单抗并观察动态变化。
b.电子显微镜看不到活细胞,因此用电镜观察,要统一去掉细菌的鞭毛的部分或者全部,然后在同样的适合鞭毛伸长的环境下让鞭毛组装(活菌),在不同的时间段用将鞭毛顶部用抗体封闭,用单克隆抗体为好。
c.固定细菌细胞,并且制备超薄切片,用电子显微镜观察。
d.设置对照,不加单抗,其他条件同实验组。要给对照组的鞭毛合适的时间进行伸长,然后再在同一时刻固定化两组细菌细胞和鞭毛,进行电子显微镜观测。
注意:多分数次时间,而且使用单抗封闭鞭毛顶端与固定样品用电镜观察之间要有一定时间间隔。