结构推理 PCR反应的基本原理是什么?
【正确答案】DNA聚合酶能够在体外酶促合成DNA片段,条件是以单链DNA为模板,以dNTP为底物,同时需要引物、Mg2+存在。一个典型的PCR反应通常包括3个基本步骤:①高温变性,在94℃时模板DNA变性,双链解开变为单链,可以作为复制的模板;②低温退火,降低温度至45~65℃,人工合成的2条寡核苷酸引物分别与目的片段两侧序列互补结合,形成局部双链;③中温延伸,再将温度升高至72℃,DNA聚合酶可将单核苷酸从引物3'端开始掺入,沿模板链从5'向3'方向延伸,合成新的DNA链。一般经25~30个循环,目的片段的数量可放大数百万倍。
【答案解析】