问答题 (四川大学2006年考研试题)今有以下四种蛋白质的混合物:①分子量50000,pI=10;②分子量72000,pI=3.5;③分子量31,000,pI=7;④分子量12000,pI=5,用中性盐梯度洗脱时,若不考虑其他因素:(1)当它们流过DEAE一纤维素阴离子交换柱;(2)流经SephadexG-100凝胶过滤柱时,这些蛋白质的洗脱顺序如何?
【正确答案】正确答案:(1)用DEAE-纤维素阴离子交换柱分离蛋白质,在一定的pH条件下,等电点pI>pH的蛋白质带正电,不能与阴离子交换剂结合;等电点pI<pH的蛋白质带负电,能与阴离子交换剂结合,一般pI越大的蛋白质与阴离子交换剂结合力越弱,首先被洗脱下来。比较4种蛋白质的等电点pI:①>③>④>②。所以,当它们流过DEAE-纤维素阴离子交换柱,洗脱顺序为①→③→④→②。 (2)凝胶过滤是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。小分子物质能进入其内部,流下时路程较长,而大分子物质却被排除在外部,下来的路程短,因此大分子先流出来,小分子后流出来。比较这4种蛋白质的分子量:②>③>①>④。所以,流经Sephadex G—100凝胶过滤柱时,洗脱顺序为②→③→①→④。
【答案解析】