问答题
(西北大学2004年考研试题)简述Southern、Northem及Western杂交技术的原理及应用。
【正确答案】正确答案:Southem杂交首先用合适的限制性核酸内切酶将:DNA切割,进行电泳分离后,利用干燥的吸水纸产生毛细管作用,使液体经过凝胶,从而使DNA片段由液流携带从凝胶转移并结合在固体支持物上(近年常用转移电泳将DNA片段从凝胶转移到固体支持物上),然后用合适的探针在固体支持物上进行分子杂交,再从凝胶的相应位置确定目标DNA片段的大小,或回收目标DNA用于进一步的研究工作。 Northern印迹的原理同Southern印迹相比有两点不同:①转移的对象不同。Northern印迹是将RNA变性及电泳分离后,将其转移到固相支持物上的过程;②RNA电泳前不需像DNA那样进行酶切,也不能用碱变性,因为碱变性会导致RNA的降解。 Southem和Northem印迹杂交都属于核酸分子杂交。核酸分子杂交技术可应用于基因克隆的筛选和酶切图谱制作,基因组中特定基因序列的定量和定性检测、基因突变分析以及疾病的诊断等方面。 Western印迹是将经电泳分离的蛋白质从凝胶转移到一定的支持膜上,再用该蛋白质的标记抗体检测,从膜上的区带确定目标蛋白质在凝胶上的位置。在基因表达研究中,若能找到目标蛋白的抗体或抗血清,可以用这种办法确定目标基因是否表达,并大致确定其表达量。还可以在目标基因的上游或下游插入一段市场上已有相应抗体供应的短肽的基因,表达的蛋白质N端或C端有短肽存在,经Western印迹,可以分析目标蛋白的表达状况。
【答案解析】