简述双脱氧链终止法进行。DNA测序的原理和方法。
 
【正确答案】(1)双脱氧链终止法进行DNA测序的原理 双脱氧核苷酸是人造分子,这种分子糖环的2'和3'碳上都没有羟基基团,而在天然分子中糖环的3'碳上有一个羟基。将当2',3'-双脱氧ddNTP掺入到新合成的DNA链中,由于掺入的ddNTP缺乏3'-OH基团,因此不能与下一位核苷酸反应形成磷酸二酯键,DNA合成反应将终止。 (2)双脱氧链终止法进行DNA测序的方法 ①在DNA。测序反应中,加入模板DNA(即待测序样本)、特异性引物、四种dNTP(带放射性标记)和DNA聚合酶分成四管。 ②在四管反应系统中分别按比例掺入四种双脱氧碱基,只要双脱氧碱基掺入链端,该链就停止延长,链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。 ③每管反应体系中会产生以共同引物为5'端,以双脱氧碱基为3'端的一系列长度不等的核酸片段。 ④反应终止后,分四个泳道进行电泳,以分离长短不一的核酸片段(长度相邻者仅差一个碱基),根据片段3'端的双脱氧碱基,便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序。
【答案解析】