以胆固醇酯酶(CHE)水解胆固醇酯为游离胆固醇和脂肪酸。再以胆固醇氧化酶(CHOD)氧化游离胆固醇为△⁴_-胆甾烯酮并产生过氧化氢。也有人在酶配方中加入辣根过氧化物酶(HRP),可以使产生的过氧化氢迅速被氧化，从而使平衡右移，有利于CHE和CHOD的酶促反应进行。根据此反应，利用循环伏安法或者计时电流法可以电流的大小反映胆固醇的含量。也可通过氧电极(检测氧的消耗)、过氧化氢电极(测H₂O₂的产生)和pH电极(检测酸度变化)来间接测定胆固醇的含量。因此它是一种酶电极传感器。