简述PCR的原理及应用。
 
【正确答案】PCR是根据天然DNA的复制机制在体外通过酶促反应有选择地大量扩增(包括分离)一段目的基因的技术。 (1)PCR的原理 根据碱基配对原理,在DNA聚合酶作用下,以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3'—OH末端,并以此为起始点,沿模板5'→3'方向延伸,合成一条新的DNA互补链。 (2)PCR的应用 ①基础科学研究的应用 扩增目的基因和鉴定重组子、基因克隆、基因功能和表达调控研究、基因组测序、制备单链模板以及引入突变等。 ②临床应用 a.在遗传学疾病上的应用。通过PCR结合限制片段长度多态性分析(PCR-RFLP),可以从基因水平对遗传性疾病进行分析,如对血友病、遗传性耳聋、怀孕早期进行诊断等。 b.在肿瘤研究中的应用。PCR广泛应用于肿瘤的病因与发病机制研究以及肿瘤诊断与治疗的研究。如针对不同肿瘤寻找其特异而敏感的标志物、检测微小残留病灶等。 c.检测病原体。PCR检测的病原体包括各种细菌、病毒、沙眼衣原体、支原体、寄生虫等。 d.在基因分型中的应用。如序列特异性寡核苷酸多态性PCR常用于对人类白细胞抗原(HLA)进行分型。 ③在法医学中的应用 对法医学标本做遗传学鉴定。 ④其他应用 a.分析激活癌基因中的突变情况。 b.生成克隆化双链DNA中的特异序列作为探针。
【答案解析】