结构推理 基因分型的方法有哪些?简述其原理。
【正确答案】基因分型(Genotyping)是利用生物学检测方法测定个体基因型的实验技术。使用技术包括聚合酶链反应(PCR)、DNA片段分析、基因测序、核酸杂交、基因芯片技术等。
   (1)聚合酶链反应(PCR)
   (2)DNA片段分析(以RFLP为例)
   每一限制性核酸内切酶在切割DNA分子时都有固定的切点序列,DNA分子中核苷酸排列顺序的变化有可能使该切点丢失或增加。由于不同生物群体的DNA序列千差万别,因而用同一限制性内切酶切割,所得DNA的长度分布也是千变万化的,这种酶切片段长度分布的多样性就称为限制性片段长度多态性(RFLP)。该技术的原理就是基于限制性内切酶酶切消化核酸以及标记的DNA探针能与任何序列相似的片段杂交,通过片段长度的变异检测多态性。
   (3)基因测序(以焦磷酸测序为例)
   焦磷酸测序是一种不依赖平板胶或毛细管电泳、不依赖DNA的荧光标记/激发/检测的新型的酶联级联测序技术,该技术基因分型。其原理是:引物与模板退火后,在DNA聚合酶、硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶4种酶的协同作用下,每一个的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来,以荧光信号的形式实时记录模板的核苷酸序列。
   (4)核酸杂交
   将带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混合在一起,其相应的同源区段就会退火形成双链结构。如果退火的核酸来自不同的生物有机体,所形成的双链核酸分子就被称为杂种核酸分子。能够杂交形成杂种分子的不同来源的DNA分子,其亲缘关系较为密切;反之,其亲缘关系就比较远。因此,DNA/DNA的杂交作用,可以用来检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系,而DNA/RNA间杂种分子的形成能力可被用来揭示核酸片段中某一特定基因的位置。
   (5)基因芯片技术
   基因芯片技术的原理是将具有特定碱基序列的探针固定在特殊的载体上,待测基因经提取、荧光标记后,与固定好的探针进行杂交,最后根据荧光的强度和种类测出待测序列的碱基类别。
【答案解析】