单选题
酵母双杂交体系被用来研究______。
A.哺乳动物功能基因的表型分析 B.酵母细胞的功能基因
C.蛋白质的相互作用 D.基因的表达调控
【正确答案】
C
【答案解析】[考点]酵母双杂交体系的应用。酵母双杂交体系是上世纪90年代初发展起来的分离基因的新方法,可用于分离能与已知靶蛋白质相互作用的基因。基本原理:真核生物的转录因子大多是由两个结构上分开、功能上独立的结构域组成的。如GAL4的N端1-147个氨基酸是DNA结合域(BD),其C端768-881氨基酸是转录激活域(AD)。一般情况下,AD能与GAL4效应基因启动子上游的特定DNA区段(UAS)相结合,而此时,AD则推动了转录起始。若用基因工程的方法,将GAL4的AD和BD分别克隆到不同的载体上,导入同一细胞株中表达,效应基因无法被激活,但可把来自不同转录因子的AD或BD区域连成一个功能基因。主要实验过程:(1)选择缺失GAL4编码基因的酵母寄主菌株-SFY526或HF7c;(2)构建带有GAL1 UAS-启动子-lac Z(His3)的转化载体;(3)把已知的靶蛋白质编码基因克隆到pGBT9的多克隆位点上,把所有cDNA都克隆到pGAD424载体上,构成cDNA表达文库。(4)从大肠杆菌中分别提取这两种重组质粒DNA,共转化感受态酿酒酵母菌株。(5)将共转化的酵母菌株涂布于缺少Leu,Trp和His的培养基上,筛选表达相互作用的杂种蛋白的阳性菌落。