【正确答案】(1)目的基因的分离：微生物的多样性为基因工程提供了极其丰富而独特的基因资源；已知或未知的基因获得常常要用到微生物学的方法或系统，如基因文库构建与基因的筛选、酵母双杂交系统、噬菌体展示等。 (2)目的基因与载体的连接：目前基因工程中使用的载体基本上均来自微生物，如质粒载体、噬菌体载体、柯斯质粒载体、M13噬菌体载体、人工染色体(YAC、BAC)；绝大多数工具酶是从微生物中分离纯化得到。 (3)重组DNA分子导入受体细胞(克隆载体的宿主)：微生物细胞是基因克隆的重要宿主，如几乎所有的重组DNA的研究工作均利用大肠杆菌作为克隆基因的宿主，枯草芽孢杆菌已发展为克隆载体的宿主，酵母菌是一种理想的真核生物克隆载体的宿主。 (4)重组体的筛选：筛选时同样需要使用各种载体和宿主系统。筛选时一般最常用的方法为平板法，如插入失活法、插入表达法、噬斑形成筛选法等。 (5)克隆基因的表达：真核表达系统和原核表达系统。最常使用的表达系统为大肠杆菌表达系统和酵母表达系统。这些表达系统具有明显的优点：简便、快速高表达地获得外源基因的表达产物。