【正确答案】正确答案：(1)分离和纯化的依据。不同蛋白质由于氨基酸数目和序列不同，其立体结构不同，物化性质不同，利用不同蛋白质的不同特性，可以将其进行分离和纯化。 1)蛋白质的酸碱性质。蛋白质是两性电解质，也有等电点，即所带净电荷为零的pH值。多数蛋白质等电点为中性偏酸，约5左右。偏酸的如胃蛋白酶，等电点为l左右；偏碱的如鱼精蛋白，约为12；蛋白质在等电点时净电荷为零，溶解度最小，易聚集沉淀。同时其黏度、渗透性、膨胀性以及导电能力均为最小；蛋白质的滴定曲线形状和等电点在有中性盐存在的情况下，可以发生明显的变化。观察到的等电点在一定程度上决定于介质中的离子组成；没有其他盐类存在下，蛋白质质子供体解离出的质子与质子受体结合的质子数相等时的pH称为等离子点。等离子点对每种蛋白质是一个常数。 2)蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀。蛋白质是一种分子胶体，具有胶体溶液的性质。利用半透膜可分离纯化蛋白质，称为透析；多数球状蛋白表面分布有很多极性基团，易形成水化层，一般每克蛋白可吸附0．3到0．5克水；分子表面的可解离基团可与周围的反离子构成稳定的双电层，增加蛋白质的稳定性；蛋白质不在等电点时具有同种电荷，互相排斥，因此在等电点时易沉淀。 3)蛋白质分子的大小与形状。蛋白质分子的大小从几百到一百万，一般为10000～150000，电泳时的迁移率、透析、超滤等都取决于蛋白质分子的大小。球型、雪茄型的蛋白质在电泳、梯度离心、层析时摩擦阻力、扩散速度不同。因此蛋白质分子的大小与形状也是蛋白质分离和纯化的重要依据。 (2)蛋白质提纯的总目标：增加制品纯度或比活力，设法除去变性的蛋白质和其他杂蛋白，且希望所得的蛋白质的产量达到最高值。 (3)蛋白质分离纯化的基本原则：选择好的材料；了解目的蛋白质的稳定性；探索有效的抽提法和浓缩法；建立一套层析的组合；以较好的方法贮存。 (4)蛋白质分离纯化的步骤及具体方法。①初(粗)提：组织、细胞破碎；缓冲液提取；②粗分级分离(粗纯化)：盐析，有机溶剂沉淀，等电点沉淀，超滤浓缩等：③细分级分离(精纯化)：分子筛层析，亲和层析，疏水／反相层析，离子交换层析，吸附层析，电泳等；④结晶。