【正确答案】用亲核蛋白标记注射的方法或T抗原基因突变法都可以证明NLS的存在:
(1)亲核蛋白标记注射的方法:①放射性标记的完整亲核蛋白质如T抗原或其头、尾片段,用放射性标记的T抗原头、尾片段分别包裹直径约20nm的金颗粒;②分别注射到爪蟾卵母细胞的细胞质中;③观察、分析;④结果:完整的核质蛋白(T抗原)能够在细胞核内迅速的积累;含残基126~132的T抗原尾部片段也能被高效地转运到核内;尾部片段包裹在直径为20nm的胶体金颗粒也可在细胞核内积累;头部片段及头部片段包裹的金颗粒被拒之核外;⑤分析:显然有某种亲核的输入信号存在于尾部片段中。现在已经证实,亲核蛋白一般都含有特殊的氨基酸序列,这些内含的特殊短肽保证了整个蛋白质能够通过核孔复合体被转运到细胞核内。这段具有“定向”、“定位”作用的序列被命名为核定位序列或核定位信号。
(2)T抗原基因突变法:①射线处理或采用定点突变技术使T抗原的基因突变;②诱导T抗原合成;③检测其头、尾片段并用放射性标记已突变的T抗原尾部片段和未突变的T抗原尾部片段。④分别注射到爪蟾卵母细胞的细胞质中;⑤观察结果:未突变的T抗原能够在细胞核内迅速的积累;含突变了的氨基酸残基的T抗原尾部片段不能被转运到核内;⑥分析:某种亲核的输入信号存在于尾部片段中。现在已经证实猴肾病毒(SV40)的T抗原的核定位信号由7个氨基酸残基构成:Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val,其中任何一个氨基酸(特别是lys突变时)突变都会导致T抗原在细胞质内积累。
【答案解析】