简述全基因组鸟枪测序(whole genome shotgun sequencing)的基本步骤
 
【正确答案】全基因组鸟枪测序法是在获得一定的遗传及物理图谱信息的基础上,将基因组DNA分解成2kb左右的数百万个DNA小片段进行随机测序,辅以一定数量的10kb的克隆和BAC克隆的末端测序,利用超级计算机进行整合及序列组装。该方法是一种广泛使用的DNA测序的方法,比传统的测序法快速,但精确度较差。其基本步骤为: (1)建立高度随机、插入片段大小为1~2kh左右的基因组文库。克隆数要达到一定数量,即经末端测序的克隆片段的碱基总数应达到基因组5倍以上。 (2)高效、大规模的末端测序。对文库中每一个克隆进行两端测序。 (3)序列集合。利用新的计算机软件,完善序列集合规则,最大限度地排除错误的连锁匹配。 (4)填补缺口。有两种待填补的缺口,一是没有相应模板DNA的物理缺口,二是有模板DNA但未测序的序列缺口。可以同时建立插入片段为15~20kb的入文库以备缺口填补。
【答案解析】