结构推理 简述显微放射自显影的基本实验步骤。
【正确答案】放射自显影技术基本原理是:将放射性核素标记的物质引入生物体或细胞,参与细胞的正常代谢过程,或联结到能与特异大分子结合的探针上,利用放射性核素放出的射线作用于核子乳胶而显像,从而达到对该放射性物质在组织或细胞内定位的目的。
   放射自显影的主要步骤包括:放射核素的标记、样品制备、核子乳胶膜的制备、自显影和显影及定影等。①放射性核素标记所要研究的大分子含有放射性核素、用来示踪大分子的物质叫作示踪化合物。要研究大分子的代谢过程,所选择的示踪化合物必须是所研究大分子的前体。方法是给动物注射示踪化合物或对培养细胞在培养液中加入示踪化合物。要研究已合成的大分子的定位,则可以通过酶促反应令示踪化合物参入探针,再通过原位杂交反应令放射性探针与所要研究的大分子结合;②样品制备:电镜放射自显影中的样品制备过程与普通样品制备技术相同;③涂覆核子乳胶膜:在带有放射性核素的切片上覆盖一层核子乳胶膜,然后进行自显影过程。制备乳胶膜需在暗室内安全灯光下进行。制备方法包括环套法、浸涂法、平基法等;④自显影过程(曝光):指在无光条件(暗盒内)下让切片中放射性核素发射出来的带电粒子和乳胶中卤化银晶体作用的过程。自显影过程一般在低温(4℃)和干燥的条件下进行;⑤显影和定影:经过带电粒子作用而在核子乳胶的卤化银晶体中所产生的潜影,必须经过显影和定影才能把“像”显示出来。显影的作用是使潜影变成不稳定的影像,而定影使已显影的影像稳定下来。
【答案解析】