由于慢性毒性试验持续时间较长为确定受试物的安全限量标准，一般应设五个剂量组：零剂量组（对照组）、预期无作用剂量组、阈剂量组、发生比较轻微但有明确毒性效应的剂量组和发生较为明显的毒效应甚至致死水平剂量组（最高剂量组），以求出剂量－反应关系。

以亚慢性毒效应为出发点，即以亚慢性毒效应的阈剂量和最大无作用剂量为依据，即以其阈剂量的1/5～1/2为慢性毒性试验的最高剂量组，1/20～1/10为轻微毒效应剂量组，1/50～1/20为慢性毒性作用的预计阈剂量组，以亚慢性最大无作用剂量的1/10或阈剂量的1/100或人群实际最大摄入量的10～50倍为预计的慢性最大无作用剂量组。