【正确答案】PCR又称多聚酶链式反应,其原理根据DNA在高温下(如95℃)变性,双链解开为两条单链;降低反应温度,使两条引物在低温下(37℃)分别与两条模板互补退火,形成局部双链;之后,在中温条件下合成DNA子链。
PCR的反应过程:包括高温变性、低温退火和中温延伸3个阶段。
(1)高温变性:离心管中,加入适量的缓冲液,微量的模板DNA,人工合成的两个DNA引物,4种脱氧单核苷酸(dNTP),一种耐热的多聚酶和Mg2+。将上述溶液加热,使模板DNA在高温下(如95℃)变性,双链解开为两条单链。
(2)低温退火:反应温度,使两条引物在低温下(37℃)分别与两条模板互补退火,形成局部双链。
(3)中温延伸:再升高反应温度至中温(72℃),此时多聚酶以dNTP为原料,以两引物为复制的起点,在两条模板上合成新的DNA子链。
重复改变反应温度,即高温变性、低温退火和中温延伸3个阶段。以3次改变温度为一个循环,每一次循环就使欲扩增的DNA区段的拷贝数放大一倍,即第一次循环,每条模板双链DNA变为2条;第二次循环,则变为4条;第三次循环,变成8条……以几何级数扩增下去。一般样品经30次循环.最终使特定DNA片段放大了数百万倍。
【答案解析】