结构推理 原位杂交技术中哪些步骤可以降低探针与RNA的非特异性结合?
【正确答案】原位杂交是用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系,在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。有如下步骤可以降低探针与RNA的非特异性结合:
   (1)人工合成脱氧寡核苷酸探针能有效降低非特异性;(2)RNA/RNA形成的杂交分子具有热稳定性,而且探针的大小也比较恒定,因而增加了杂交的敏感性及均一性;反义RNA探针不含有载体顺序,不仅减少了非特异性杂交,还能防止dsDNA中第二条链的竞争性杂交。杂交后用RNA酶消化单链未杂交的探针,可明显减少本底;(3)合适的杂交温度,pH值及杂交液中甲酰胺和盐离子的浓度;(4)杂交后冲洗是减低非特异性杂交的关键步骤,应用放射性核素探针时,冲洗可达几小时,而用生物素及地高辛等标记的探针冲洗时间则可缩短为15分钟。
【答案解析】