结构推理 简述获取同步化细胞的方法。
【正确答案】根据使细胞同步化的手段不同可分为选择同步化和诱导同步化。
   (1)选择同步化:①有丝分裂选择法:使单层培养的细胞处于对数增殖期,此时分裂活跃。有丝分裂细胞变圆隆起,与培养皿的附着性低,此时轻轻振荡,M期细胞脱离器壁,悬浮于培养液中,收集培养液,再加入新鲜培养液,依法继续收集,则可获得一定数量的中期细胞。其优点是,操作简单,同步化程度高,细胞不受药物伤害,缺点是获得的细胞数量较少;②细胞沉降分离法:不同时期的细胞体积不同,而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比,因此可用离心的方法分离。其优点是可用于任何悬浮培养的细胞,缺点是同步化程度较低。
   (2)诱导同步化:①DNA合成阻断法:选用DNA合成的抑制剂,可逆地抑制DNA合成,而不影响其他时期细胞的运转,最终可将细胞群阻断在S期或G1/S交界处。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、高浓度AdR、GdR和TdR,均可抑制DNA合成使细胞同步化。其中高浓度TDR对S期细胞的毒性较小,因此常用TdR双阻断法诱导细胞同步化。DNA合成阻断法的优点是同步化程度高,适用于任何培养体系,可将几乎所有的细胞同步化。缺点是产生非均衡生长,个别细胞体积增大;②中期阻断法:利用破坏微管的药物将细胞阻断在中期,常用的药物有秋水仙素和秋水仙酰胺,后者毒性较少。优点是无非均衡生长现象,缺点是可逆性较差。
【答案解析】