【正确答案】正确答案：(1)基因工程上把那些具有识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶统称为限制性内切核酸酶。 根据限制性内切核酸酶的作用特点，将它们分为三大类：①I类限制性内切核酸酶。I类限制性内切核酸酶的分子量较大，一般在30万道尔顿以上，通常由三个不同的亚基所组成；②II类限制性内切核酸酶。这类酶的分子量较小，一般在2~4万道尔顿，通常由2～4个相同的亚基所组成。它们的作用底物为双链DNA，极少数II类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA杂种双链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，II类酶既具有切割位点的专一性，也具有识别位点的专一性，一般在识别序列内切割；③Ⅲ类限制性内切核酸酶。Ⅲ类限制性内切核酸酶是基因工程中不常用的酶，分子量和亚基组成类似于I类酶，作用方式基本同II类酶。 (2)举例说明其应用：①可以识别。DNA特定序列，切割DNA片段和载体，产生互补的黏性末端，用于定向克隆；②通过单一或两种限制性内切核酸酶酶切插入了外源片段的载体，判断外源片段是正向插入还是反向插入；③每种细菌和质粒都有特异的限制性内切核酸酶酶切图谱，可用于粗略判断细菌或质粒的种类；④切割染色体DNA，用于构建基因文库；⑤限制性片段长度多态性(RFLP)。检测DNA在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是可以引起酶切位点变异的突变如点突变(新产生和去除酶切位点)和一段DNA的重新组织(如插入和缺失造成酶切位点间的长度发生变化)等均可导致RFLP的产生。