问答题 举例说明研究蛋白质间相互作用的实验方法及其作用原理?
研究蛋白质间相互作用(protein-protein interaction)的方法有很多,可分为体内和体外两大类,这里只列举部分方法。

【正确答案】(1)体内(in vivo)研究方法:
1)酵母双杂交体系。利用真核生物转录调控因子的组件式结构特征,将DNA结合结构域(BD)与转录激活结构域(AD)分开融合到两个不同的蛋白上,当两个蛋白发生相互作用,BD和AD起作用,激活下游报告基因转录。该技术可用于筛选与靶蛋白相互作用的未知蛋白。
2)荧光共振能量转移(FRET)。当供体荧光分子荧光光谱与受体荧光分子的激发光谱相重叠时,供体荧光分子的激发能诱发受体分子发出荧光,同时供体荧光分子自身的荧光强度衰减,这种现象称为荧光共振能量转移。FRET程度与供、受体分子的空间距离紧密相关,随着距离延长而减弱。利用这项技术可以检测细胞内两个蛋白间是否有相互作用。
(2)体外(in vitro)研究方法:
1)Far Western印迹技术。一种基于western blotting的一种分子生物学方法。使用常规放射自显影技术,而不是抗体标记,可以检测能够与目标蛋白结合的非抗体蛋白质。
2)GST融合蛋白沉降技术。利用GST对谷胱甘肽偶联的琼脂糖球珠的亲和性,从混合样品中纯化得到相互作用蛋白。可用于确定探针蛋白与未知蛋白的相互作用,也可用于证明探针蛋白与已知蛋白的相互作用。
3)蛋白质芯片技术。大规模筛选蛋白互作的技术。
4)免疫共沉淀技术(Co-IP)。利用抗原抗体结合特性而发展的一门技术。抗体将相应特定分子沉淀的同时,与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。
【答案解析】