问答题 试述鉴定细胞凋亡的常用方法。
【正确答案】试述鉴定细胞凋亡的常用方法:细胞凋亡的检测是基于凋亡细胞所形成的形态学和生化特征,特别是DNA的断裂。①形态学观测:应用各种染色法可观察到凋亡细胞的各种形态学特征;②DNA电泳:细胞凋亡时,DNA发生特征性的核小体间的断裂,产生大小不同的片段,但都是180~200bp的整数倍。凋亡细胞中提取的DNA在进行常规的琼脂糖凝胶电泳,并用溴乙啶进行染色时,这些大小不同的DNA片段就呈现出梯状条带;③TUNEL测定法,即DNA断裂的原位末端标记法,这一方法能对DNA分子中3'-OH断裂缺口进行原位标记。凋亡细胞的核DNA中产生的3'-OH末端,可借助一种可观测的标记物,如荧光素进行原位标记,并用荧光显微镜进行观察;④彗星电泳法:彗星电泳法的原理是将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶中,经裂解处理后,再在电场中进行短时间的电泳,并用荧光染料染色,凋亡细胞中形成的DNA降解片段,在电场中泳动速度较快,使细胞核呈现出一种彗星式的图案;而正常的无DNA断裂的核在泳动时保持圆球形,这是一种快速简便的凋亡检测法;⑤流式细胞分析:最常用来分析细胞凋亡的流式细胞技术时根据凋亡细胞DNA断裂和丢失,采用碘化丙啶使DNA产生激发荧光,用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细胞,同时又能观察细胞的周期状态。
【答案解析】