结构推理 直接选择法的特点是直接测定基因表型,具体包括哪些
【正确答案】直接选择法是针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因而设计的筛选方法,其特点是直接测定基因表型。具体包括:①抗生素抗性筛选。如果克隆载体携带有某种抗药性标志基因,则只有含这种抗药基因的转化子细菌才能在含该抗菌药物的培养板上幸存并形成菌落。②营养缺陷筛选。若克隆的基因能够在宿主菌表达,且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补,那么就可以利用营养突变菌株进行筛选。③α互补筛选。常用作克隆载体的经过改造的M13载体中带有大肠杆菌的一段调节基因和β-半乳糖苷酶N末端146个氨基酶残基的编码基因,其编码产物是β-半乳糖苷酶的a片段。而常用作克隆载体转化和筛选基因工程菌是突变型大肠杆菌,可表达β-半乳糖苷酶C末端的ω片段。β-半乳糖苷酶的α片段和ω片段在单独存在时均无活性,只有当宿主细胞与克隆载体同时表达这两个片段时,二者通过互相协助可在宿主细胞内形成一个具有β-半乳糖苷酶活性的蛋白质,因此称为α互补。在诱导物异丙基—β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)存在下,大肠杆菌在含色素底物5-溴-4-氯-3-吲哚—β-D-半乳糖苷培养基的平板上可形成蓝色菌落。当在克隆载体的多克隆位点中插入外源DNA时,可使β-半乳糖苷酶的N末端(即β-半乳糖苷酶的α片段)失活,从而不能进行互补,因此带有重组质粒的细菌产生白色菌落。④分子杂交筛选。利用32P标记的探针与转移至硝酸纤维素膜上的转化子DNA或克隆的DNA片段进行分子杂交,直接选择并鉴定目的基因。
【答案解析】