问答题 用什么试剂可将胰岛素链间的二硫键打开与还原?如果要打开牛胰核糖核酸酶链内的二硫键,则在反应体系中还必须加入什么试剂?蛋白质变性时为防止生成的-SH重新被氧化,可加入什么试剂来保护?
【正确答案】
【答案解析】在蛋白质分子中,由于二硫键的作用,可以使两条以上的肽链相连,也可以使肽链卷曲成环状。在进行蛋白质一级结构的测定时,无论是链间或链内的二硫键都必须拆开,使各条肽链彼此分离或伸展,方可测定。拆开二硫键的方法有氧化法和还原法两种。过甲酸(即过氧化氢+甲酸)氧化法可将二硫键氧化成磺酸基而断开。
最常用的打开二硫键的方法是使用巯基试剂还原打开,如巯基乙醇,可使参与二硫键的2个半胱氨酸还原为带有游离巯基的半胱氨酸,为了使还原反应能顺利进行,通常加入一些变性剂,如高浓度的尿素等。加入过量的变性剂可以防止还原所得的巯基被重新氧化。如果不准备使肽链重新氧化,而是进一步进行化学结构的研究,可以将巯基转化为其他的修饰形式,如羧甲基化、烷基化等。