【正确答案】分子标记是能够用来作为指纹鉴定或区分个体特点的DNA片段。这种标记在遗传学研究和生物技术应用方面具有非常重要的作用。分子标记的基础是个体间存在的自然遗传变异,进而造成许多遗传序列的多态性,即这些序列在不同的个体表现不同。分子标记就是通过查找和应用这种变异对个体、性状和基因在遗传差异的基础上进行鉴别。
(1)限制性片段长度多态性(restrietion fragment length polymorphism,RFLP),是发展最早的分子标记技术。其原理是检测DNA在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是可以引起酶切位点发生变异的突变都可导致RFLP的产生。此技术包括以下基本步骤:①DNA的提取和纯化;②DNA的限制性内切酶酶切;③用凝胶电泳将DNA片段分开;④把DNA片段转移到滤膜上;⑤利用放射性标记的探针与滤膜上的DNA片段进行杂交(Southern杂交)以显示特定的DNA片段,然后分析结果。
(2)随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD):该技术用随机引物非定点地扩增DNA片段,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳分开扩增片段。其特点包括:①不需DNA探针,设计引物也不需要预先知道序列信息;②用一个引物就可扩增出许多片段,总的来说RAPD在检测多态性时是一种相当快速的方法;③技术简单,RAPD分析不涉及分子杂交、放射自显影或其它技术;④RAPD分析所需DNA样品量少;⑤RAPD分析中存在的最大问题是重复性不太高,因为在PCR反应中条件的变化会引起一些扩增产物的改变。
(3)扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP):其特点是把RFLP和PCR结合了起来。其基本步骤是:把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”,用与接头互补的但3'端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3'-端严格配对的片段才能得到扩增,再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物,用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。
(4)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)技术:同一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异,因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。目前SNP作为一种新的分子标记,已有2000多个标记定位于人类染色体上,在植物上也在进行开发研究。
【答案解析】[考点]分子标记的演化。