问答题 细胞周期同步化有哪些方法?
【正确答案】(1)振荡收集法:该法利用M期细胞变圆易脱落的特点,将生长旺盛的贴壁细胞按一定的时间间隔振荡,使M期细胞脱落,逐步收集培养基,并补充新的培养基。收集的细胞放4~E冰箱中保存,离心沉淀后即获得M期细胞。 (2)秋水仙胺阻抑法:①将细胞传代培养至指数生长期。②加入秋水仙胺,使最终浓度为0.05~0.1μm/mL培养基,作用6~7h。如使用秋水仙素,使用浓度应加大5~10倍。③收集细胞,800r/min离心5~10 min,弃上清液,收集的沉淀细胞即为M期细胞。加入一定量培养基将细胞接种到培养瓶中或直接进行离体实验。由于秋水仙素或秋水仙胺对细胞有一定毒性,用量较小或作用时间较短细胞活性尚可恢复,而用量过大或时间过长则细胞不能存活,因此使用时应严格控制其剂量和作用时间。 (3)N2阻断法:此方法较秋水仙胺阻抑法好。①将细胞传代培养至指数生长期。②将培养瓶置于N2罐中通入适量CO2(约相当于罐中体积的5%)。③关闭好N2罐,接上N2管子及压力表,缓缓向罐中充气一直到压强为5.625×105-6.328×105Pa为止。④将N2装置放在37℃培养箱中10~16h(通常过夜)。次日从培养箱中取出,然后缓缓将N2放出(最好放出窗外)。⑤取出细胞在镜下观察同步化效果,用振荡法收集细胞于离心管中。⑥800r/min离心10min,收集细胞。
【答案解析】