【正确答案】
【答案解析】①TUNEL方法——该法能对DNA分子断裂缺口中的3"-OH进行原位标记,借助荧光素或其他可观测的标记物,对凋亡细胞DNA中产生的3"-OH末端进行原位标记,再用荧光显微镜观察,可发现染色体断裂;②彗星电泳法——凋亡细胞中的DNA降解片段在电场中的泳动速度较快,使细胞核呈现出一种彗星式的图案,而正常的无DNA断裂的核在泳动时保持圆球形;③流式细胞分析——与正常完整的二倍体细胞相比,凋亡细胞的DNA发生断裂和丢失,呈亚二倍体状态,采用碘化丙锭染色使DNA产生激发荧光,流式细胞仪即可检测到凋亡的亚二倍体细胞。细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞;④DNA凝胶电泳——检测原理:细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小相对分子质量DNA片断增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现180~200bp DNA片断,而坏死细胞的DNA断裂点为元特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。⑤形态学观察方法——a.HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。b.丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。c.台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。d.透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。