问答题
一个酶用多种方法充分纯化后被认为已经是纯的了。也就是说,在用多种溶剂进行层析,并在不同的pH值进行电泳和在不同离子强度和成分的溶液中离心后均显示单一的峰。在用SDS-凝胶电泳分析后,得到两条带,其中一条带比另一条带宽一倍。由此可得到关于该蛋白质的什么信息?由于纯化程度总是难以证明,如何证明所作的假设是正确的?提示:用凝胶层析。
【正确答案】很可能蛋白质有亚基,尽管可能初始样品包含不同分子量的两个蛋白质,且它们的电泳率和层析特性几乎相同,但这几乎不可能。假设此蛋白质有亚基,有很多可能性存在,如有大亚基比小亚基分子量大两倍,而亚基的数量比与分子量比相等。或者有三个亚基,其中较小的一个有二个拷贝,大的有一个大亚基,分子量是小亚基的4倍,后面这种可能性可以与前两种区分开来,因SDS-PAGE电泳由蛋白质的分子量决定,还可以用胶层析进一步鉴定,如果初始样品包含有2种不同分子量的样品,这些分子会在胶层析中分开,如果没有观察到明显的分开,亚基的解释应该是正确的。
【答案解析】