问答题细胞周期运转到分裂中期时，周期蛋白A和B通过泛素化途径降解。

问答题简述蛋白质的泛素化降解途径。

【正确答案】

【答案解析】蛋白质的泛素化降解途径的主要步骤：①识别被降解的靶蛋白；②多个泛素分子共价结合到蛋白质底物上，形成多泛素链；③通过26s的蛋白酶体复合物降解靶蛋白，同时释放游离的、可重新利用的泛素分子。目前发现参与泛素化反应的酶有E1、E2、E3三类，E1即泛素活化酶(Ub activating enzyme)，在ATP的参与下，E1以其活性位点半胱氨酸的巯基与泛素的C末端生成高能硫酯键，使泛素活化；E2即泛素结合酶(Ubs)，是多个成员组成的蛋白家族，可接受E1传递来的Ub，在E3的参与下将Ub转移到底物上。

问答题在上述泛素化降解途径中，蛋白降解的特异性(即确保只有该降解的蛋白被降解)是如何实现的?

【正确答案】

【答案解析】降解的蛋白有其特异E3，E3能识别底物的N末端残基，决定底物的特异性。

问答题周期蛋白A和B的分子结构中含有一段9个氨基酸序列组成的破坏框。请设计一个实验，证明该破坏框在周期蛋白A和B的泛素化降解途径中起了重要作用。

【正确答案】

【答案解析】将周期蛋白A和B的破坏框缺失或突变掉，引入到细胞中表达，然后显示周期蛋白A和B不能通过泛素化途径降解。

问答题如何证明周期蛋白A和B的存在对于驱动细胞周期从M期中期向后期转化是必需的?请提出两种不同的实验方案。

【正确答案】

【答案解析】siRNA沉默，基因敲除，表达Dominant Negative变种三种方案中的选两种。