问答题
一个蛋白质混合物含有下面几种不同组分:a、Mr=12000,pI=10;b、Mr=62000,pI=4;c、Mr=28000,pI=7;d、Mr=9000,pI=5;不考虑其他因素,分别指出在下述情况下被洗脱的顺序。
【正确答案】DEAE—Sepharost下是一种常用阴离子交换剂。在分离蛋白质样品前,先用较低的离子强度和pH=8.0的缓冲液平衡,蛋白质样品也溶于同样缓冲液中。在这样的条件下,DEAE—sepharosFF大部分解离,带正电荷。蛋白质样品中各组分带净负电荷越多,与DEAE—SepharosFF的结合力越强。另外,当升高洗脱液的阴离子浓度时,被分离组分与DEAE—SepharosFF的结合力降低。根据上述原理,该蛋白质混合物各组分被洗脱下来的先后顺序是:a>c>d>b。
【答案解析】
【正确答案】Sephacry1是葡聚糖凝胶,它是具有不同交联度的网状结构,其颗粒内部的孔径大小可以通过控制交联剂与葡聚糖的比例来达到,已有不同型号的葡聚糖凝胶用于不同物质的分离。用它作为填充料制成层析柱,当蛋白质混合样品随洗脱液向下流动时,比凝胶颗粒内孔径大的蛋白质分子不能进入凝胶网格内,被排阻在凝胶颗粒的外部;比凝胶颗粒内孔径小的蛋白质分子能进入凝胶网格内部。其结果是,分子大的蛋白质随着洗脱液直接从柱上流出,分子比较小的蛋白质则因走了许多“弯路”而被后洗脱下来。分子愈小,“弯路”走得愈多,洗出的速度愈慢。根据这一原理,上述蛋白质混合物从Sephacryl洗脱出的顺序是:b>c>a>d。
【答案解析】