问答题
(浙江大学2008年考研试题)氨基酸的序列决定了蛋白质的分子构造和功能,请阐明至少两种分析决定氨基酸序列的方法及其原理,并比较说明这些方法的优缺点。
【正确答案】正确答案:质谱分析。其原理是:通过电离源将蛋白质分子转化为气相离子,然后利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(M/Z值)的蛋白质离子分离开来,经过离子检测器收集分离的离子,确定离子的M/Z值,分析鉴定未知蛋白质。 特点:质谱分析用于蛋白质等生物活性分子的研究具有如下优点:很高的灵敏度能为亚微克级试样提供信息,能最有效地与色谱联用,适用于复杂体系中痕量物质的鉴定或结构测定,同时具有准确性、易操作性、快速性及很好的普适性 Edman法,又称PTH法,Edman降解法是用异硫氰酸苯酯在弱碱条件下与肽段N端α一氨基结合生成苯氨基硫甲酰肽(PTC-肽),然后在酸性条件下经环化、水解处理,生成苯乙内酰硫氨基酸(PTH-aa)和失去原N一端氨基酸的肽。剩下的肽可反复进行上述处理,依次生成各种PTH一AA,经层析鉴定就可从N-端开始确定被测肽段的氨基酸排列顺序。 特点:一次可测出60~70个氨基酸残基组成的肽。测序速度较慢(50个氨基酸残基/天);样品用量较大(nmol级或几十pmol级);对样品纯度要求很高;对于修饰氨基酸残基往往会错误识别,而对N末端保护的肽链则无法测序。
【答案解析】