【正确答案】正确答案：1977年Sanger对：DNA酶法测序技术作了重要改进，提出了“终止法”，其原理是利用2’，3’-双脱氧三磷酸苷(2’，3"-ddNTP)来终止DNA的复制反应。大肠杆菌DNA聚合酶在复制过程中催化多核苷酸链的延伸，单核苷酸是接在延伸链的3’一OH上，所以，如果掺入的底物中有2’，3"-ddNTP，延伸反应即终止。 过程：设计四组反应，每组反应中都含有正常的四种脱氧核糖核苷酸dNTP(其中一种为 ³² p-标记)、单链DNA模板(即待测的DNA)、引物、DNA聚合酶I。另外，各组反应加入一种2’，3"-ddNTP。反应结果，在加入2’，3"-ddNTP的反应中，凡碰到需要dNTP的时候，如果掺入的不是dNTP，而是2’，3"-ddNTP时，链延伸反应即终止。其他各组反应结果同理，用凝胶电泳分析这四组反应的产物，即可从放射自显影上读出DNA的序列。 1975年，Sanger提出DNA测序的新策略，即设法获得一系列多核苷酸片段，使其末端固定在一种核苷酸，然后通过测序片段的长度来推测核苷酸的序列。 Sanger于1975年设计的DNA快速测序法称为“加减法”。过程是：以单链DNA为模板，加入适当的引物，四种脱氧核糖核苷酸dNTP和。DNA聚合酶使合成反应尽可能随机进行，合成各种长度的产物片段，然后从反应体系中除去4种dNTP，并将反应物分成8组，4组用于加法系统，4组用于减法系统。加法系统每组只加A、G、C、T和一种dNTP，减法系统每组加3种dNTP(分别减去A、G、C、T，一种dNTP)。在加法系统中，DNA聚合酶的3’→5’外切酶将除该核苷酸外所用3’末端核苷酸都水解掉，于是3’末端核苷酸都变成了该核苷酸。在减法系统中，DNA聚合酶能够把片段继续合成下去，直到遇上所缺的核苷酸才停止，这就得到了都在所缺核苷酸前一个核苷酸结尾的片段。最后，将各组样品都进行凝胶电泳，从放射自显影的图谱上可以推测出DNA的核苷酸序列。