问答题 什么是感受态细胞?在实验室制备感受态细胞后,需要做哪些实验检测其性能?
【正确答案】正确答案:细胞处于能够吸收外源DNA的状态称为感受态,经特殊处理后处于此状态的细胞称为感受态细胞。 为保证宿主细胞是感受态细胞,而且无污染,需作3个试验。 取l管分装的感受态细胞,不作转化(比如不加DNA,但和实验样品平行处理),将等量的细菌涂布到含抗菌素和不含抗菌素的平板上。含抗菌素的平板应无菌落生长,生长有菌落就表明污染了质粒或抗菌素失效,为区别可从生长的菌落中提取质粒,以鉴别原因。不含抗菌素的平板上应生长了许多菌落,甚至菌落群,反之表明细菌无活力。 第3个实验是确定感受态细胞的转化效率。将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中,取一部分转化的细菌,涂布到选择培养基上,可用菌落生长单位/μg DNA,按下面的方法计算感受态细胞的转化效率: 用0.1ng完整的质粒.DNA转化100μl的感受态细胞,向转化反应液中加入900μl培养液(0.1ng/1ml),让细菌恢复一小段时间(1小时)。将转化反应用培养液作1:0的稀释(0.01ng/ml),取其中100μl的稀释液来涂布(0.001ng DNA/100μl)。如能豸犬得200个克隆,转化效率是2×10 8 cfu/μg DNA,计算方法如下: 200cfu/0.001ng=2×10 5 cfu/ng=2×10 8 cfu/μg DNA 转化效率1×10 6 cfu/gg DNA可满足普通的亚克隆实验;1×10 7 cfu/μg DNA用于作更复杂的亚克隆,有限量的DNA的转化,T-克隆实验;构建文库和突变要求用的转化效率>1×10 8 cfu/μg DNA。
【答案解析】