结构推理 假设已有质粒中含有rRNA基因克隆的大肠杆菌菌株,如何显示rRNA基因存在于小鼠的哪些染色体上?
【正确答案】将基因定位在某条染色体上,目前最常采用的方法是荧光原位杂交技术。首先制备小鼠细胞染色体,可以用小鼠的骨髓细胞制备。取小鼠的骨髓细胞用秋水仙素处理,固定、低渗处理后滴片,镜检可观察到分散较好的小鼠染色体;提取含有有rRNA的大肠杆菌的质粒,用生物素对质粒上该基因进行标记,制成探针;进行原位杂交,将染色体制片中的DNA变性处理,与生物素标记好的探针进行杂交;用抗生物素的FITC与生物素结合进行荧光标记,PI或DAPI对标本进行复染就可以在荧光显微镜下镜检观察杂交信号存在于染色体的位置,有杂交信号的位置即基因所在的位置,从而将基因定位在某条染色体的某个位置上。
   或者采用放射自显影技术,其具体步骤如下:①DNA探针的制备:从含有rRNA基因克隆的大肠杆菌菌株中分离rDNA,并用放射性核素标记;②小鼠骨髓染色体制备:用秋水仙素处理小鼠,分离骨髓细胞、固定、制片;③原位杂交:将染色体制片中的DNA进行变性处理,并与rDNA探针杂交;④放射自显影;⑤显微镜观察:根据银粒的出现位置确定rRNA基因存在于哪些染色体上。
【答案解析】