问答题 用什么方法追踪细胞中蛋白质合成与分泌过程?包括哪几个步骤?
【正确答案】追踪活细胞中某种蛋白质合成和分泌的过程一般采用同位素示踪技术。其基本步骤是:①将放射性核素标记的氨基酸(如常用的3H-亮氨酸)加到细胞培养基中,在很短的时间内使这些标记分子进入细胞;②去除培养液并洗涤细胞,再换以含未标记氨基酸的培养基培养细胞,已进入细胞的标记氨基酸将被蛋白质合成系统作为原料加以利用,掺入到某种新合成的蛋白质中;③每隔一定时间取出一定数量的细胞(取样),利用电镜放射自显影技术探查被标记的特定蛋白质在不同时间所处的位置。具体说,将每次取样所得的细胞经固定、包埋后制备成细胞的超薄切片,放到有支持膜的载网上,涂上核子乳胶,放到暗处曝光一段时间,即让细胞内带有放射性核素的蛋白质发出的射线使乳胶感光。然后将核子乳胶显影、定影便得到电镜放射自显影的标本。在电镜下观察该标本中银粒的分布、相关蛋白质在细胞中的位置及数量的多少。通过比较不同时间取样细胞的电镜照片就可了解细胞中蛋白质合成及分泌的动态过程。
【答案解析】