【正确答案】(1)大部分酶是蛋白质，需要用提取蛋白质提取的方法来提纯酶： ①前处理 分离纯化某一蛋白质，首先要求把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持原来的天然状态，不丢失生物活性。 ②粗分级分离 当蛋白质提取液(有时还杂有核酸、多糖之类)获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白质与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分级分离用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。 ③细分级分离 样品经粗分级分离以后，一般体较小，杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤，离子交换层析，吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级的方法一般规模较小，但分辨率很高。 ④结晶 结晶是蛋白质分离纯化的最后步骤。 (2)注意事项 ①选材 选择酶含量丰富的新鲜生物材料，酶的提取工作应在获得材料后立即开始，否则应在低温下保存，－20～70℃为宜。或将生物组织做成丙酮粉保存。 ②破碎 动物组织细胞较易破碎，通过一般的研磨器、匀浆器、高速组织捣碎机就可达到目的。微生物及植物细胞壁较厚，需要用超声波、细菌磨、冻融、溶菌酶或用某些化学溶剂如甲苯、去氧胆酸铺、去垢剂等处理加以破碎，制成组织匀浆。 ③抽提 在低温下，以水或低盐缓冲液，从组织匀浆中抽提酶，得到酶的粗提液。 ④分离及纯化 酶是生物活性物质，在分离纯化时必须注意尽量减少酶活性损失，操作条件要温和，全部操作一般在 0～5℃间进行。 ⑤结晶 通过各种提纯方法获得较纯的活性蛋白溶液后，就可能将活性蛋白进行结晶。 ⑥保存 通常将纯化后的活性蛋白溶液经透析除盐后冰冻干燥得到活性蛋白粉，低温下可较长时期保存。或将活性蛋白溶引用饱和硫酸铵溶液反透析后在浓盐溶液中保存。也可将活性蛋白溶液制成25%甘油或50%甘油分别贮于－20℃或－50℃冰箱中保存。注意活性蛋白溶液浓度越低越易变性，因此切记不能保存活性蛋白的稀溶液。