说说荧光染料SYBR Green Ⅰ和TaqMan荧光探针的主要不同点。
 
【正确答案】荧光染料SYBR Green Ⅰ和TaqMan荧光探针的荧光信号强度代表了模板DNA的拷贝数,但有不同。 (1)原理不同 ①SYBR荧光染料 SYBR荧光染料激发光波长520nm,将SYBR荧光染料混合在PCR液中,只有与双链DNA结合后,才能发射荧光信号,以保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。 ②TaqMan荧光探针 TaqMan荧光探针是与靶DNA序列中间部位结合的单链DNA(一般为50~150bp),并且该单链DNA的5'和3'端带有短波和长波两个不同荧光基团。 这两个荧光基团由于距离过近,在荧光共振能量转移(FRET)作用下发生了荧光淬灭,因而检测不到荧光。PCR反应开始后,随着双链DNA变性产生单链DNA,TaqMan探针结合到与之配对的靶DNA序列上,并被具有外切酶活性的Taq DNA聚合酶逐个切除而降解,从而解除荧光淬灭的束缚,荧光基团在激发光下发出荧光,产生的荧光强度直接反映了被扩增的靶DNA总量。 (2)特异性不同 荧光染料SYBR Green Ⅰ能与所有的双链DNA结合,对DNA模板没有选择性,不能区分不同的双链DNA;而TaqMan荧光探针仅能与目的DNA序列特异结合。
【答案解析】