结构推理 当两种限制性核酸内切酶的反应条件不同时,若要采用双酶切的方法,应采取什么措施?为什么?
【正确答案】要避免产生星活性及部分酶切。
   措施:(1)先用低盐缓冲液中活性最高的限制性核酸内切酶去酶切,再补充盐分后,以第二种限制性核酸内切酶去酶切;
   (2)用第一种限制性核酸内切酶消化完全后,用酚/氯仿/异戊醇抽提,然后以乙醇沉淀,再将DNA重新溶解,加入适合第二种限制性核酸内切酶的缓冲液,以第二种限制性核酸内切酶消化;
   (3)先用酶切温度较低的限制性核酸内切酶消化,然后用酶切温度较高的限制性核酸内切酶消化;
   (4)使用通用缓冲液。
【答案解析】