问答题 凝胶过滤或分子筛层析是一种以蛋白质大小为基础的分离蛋白的方法。蛋白质溶液放在填有高度水化的交联聚合材料(如Sephadex-交联葡聚糖)细珠上。不同大小的蛋白质穿过水化细珠微孔的能力不同。较小的蛋白质要比较大的蛋白质容易穿过微孔,因而较小的蛋白质过细珠的速度要比较大的慢。
分离蛋白质的第二种技术是圆盘电泳。它使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶支持物中受到电场的作用,在变性剂十二烷基硫酸钠(SDS)存在下进行电泳时,蛋白质分子按大小被分离开来,较小的分子移动得快。(SDS可使蛋白质变性,并与它们进行非特异性结合,给出一个恒定的电荷质量比)。
这两种方法都是根据大小对蛋白质进行分级分离的,并且都使用交联聚合物作为支持介质。为什么在凝胶过程中小分子比大分子更易滞留,而在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中情况恰是相反?
【正确答案】
【答案解析】每一个交联葡聚糖珠的交联基质都把大的蛋白质排阻在外,而允许小的蛋白质进入。因此,大的蛋白质必须在这些珠之间通过,也就是通过柱体积减去珠体积(此差值称之为空柱体积),小的蛋白质则通过总的柱体积。蛋白质颗粒越大,它在珠内所耗的时间越少,因此,洗脱得越快。
电泳用的聚丙烯酰胺凝胶支持物相当于一个大的珠;这里没有珠之间的空隙,所有蛋白质必须通过交联基质。蛋白质越小,它通过交联基质越容易,因此移动得越迅速。