结构推理
你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA,请从所引列引物中选出合适的一对。
5'-GACCTGTGGAAGC—CATACGGGATTG-3'
3'-CTGGACACCTrCG—GTAFGCCCTAAC-5'
引物1 引物2
5'-GACCTGTGGAAGC 5'-CATACGGGATFG
5'-CTGGACACCTI'CG 5'-GTATGCCCTAAC
5'-CGAAGGTGTCCAG 5'-GTYAGGGCATAC
5'-GCTFCCACAGGTC 5'-CAATCCCGTATG
【正确答案】引物1:5'-GACCTGTGGAAGC;引物2:5'-CAATCCCGTATG。
【答案解析】[考点]引物设计的一般原则。(1)引物长度一般为15~30个核苷酸。(2)碱基随机分布,避免出现嘌呤,嘧啶的堆积现象。G+C的含量为45~55/%。3'端和5'端引物具有相似的Tm值。Tm=4(G+C)+2(A+T)。引物长度要确保解链温度不低于54℃。(3)避免发夹结构形成,引物自身存在的连续互补序列,一般不超过3bp。(4)两个引物之间不应存在互补序列,尤其应避免3'端的互补重叠。(5)引物的碱基序列不应与非扩增区域有同源性。(6)引物3'端碱基一定要与模板DNA配对,最佳碱基选G和C。(7)引物的5'端可以修饰,如加限制酶位点,引入突变位点,起始密码子,终止密码子等。