【正确答案】细胞凋亡(apoptosis)是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程,又称为程序性细胞死亡。细胞凋亡对个体的正常发育,自稳态的维持,免疫耐受的形成,肿瘤监控等多种生理及病理过程有重要的意义。在发育过程中,幼体器官的缩小和退化,是通过细胞凋亡实现的。细胞凋亡还是一种生理保护机制,能够清除体内多余、受损或危险的细胞而不对周围的细胞或组织产生损害。细胞凋亡具有明显的形态学和生理生化特征。常用的检测方法如下:
(1)形态学观测应用各种染色法可观察凋亡细胞的形态学特征,有些染料如台盼蓝为活细胞排斥,但可以使死细胞着色。DAPI是常用的一种与DNA结合的荧光染料,借助荧光显微镜可以观察细胞核的形态变化。此外,使用透射和扫描电镜可观察凋亡细胞的形态、结构变化,如染色质固缩、凋亡小体形成、细胞发泡等现象。
(2)DNA电泳细胞凋亡时,细胞内特异性核酸内切酶活化,染色质DNA在核小体间被特异性切割,DNA降解成180~200bp或其整倍数片段。因此凋亡细胞中提取的DNA在进行常规的琼脂糖凝胶电泳,并用溴化乙啶进行染色时,这些大小不同的DNA片段就呈现出梯状条带。该方法是鉴定细胞凋亡最简便可靠的方法。
(3)TUNEL测定法(DNA断裂的原位末端标记法) 该方法能对DNA分子断裂缺口中的3'-OH进行原位标记。借助一种可观测的标记物,如荧光素能对凋亡细胞的DNA中产生3'-OH末端进行原位标记,用荧光显微镜即可进行观察。
(4)彗星电泳法(comet assay) 该方法的原理是将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶中,经裂解处理后,再在电场中进行短时间的电泳,并用荧光染料染色。凋亡细胞中的DNA降解片段在电场中泳动速度较快,使细胞核呈现出一种彗星式的图案,而正常的无DNA断裂的核在泳动时保持圆球形。这是一种快速简便的凋亡检测法。
(5)流式细胞分析与正常完整的二倍体细胞相比,凋亡细胞DNA发生断裂和丢失,呈亚二倍体状态。采用碘化丙啶染色使DNA产生激发荧光,流式细胞仪能够检测出凋亡的亚二倍体细胞。
【答案解析】