（1）分—载体和目的基因的分离、纯化；

（2）切—载体和目的基因分别用限制性核酸内切酶的切割；

（3）接—载体和目的基因连接成重组体；

（4）转—重组体DNA导入受体细胞；

（5）筛—筛选并扩增正确重组的DNA分子。