问答题 (西北大学2004年考研试题)说明SDS.聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理、方法及应用。
【正确答案】正确答案:(1)原理。SDS即十二烷基硫酸钠是阴离子去污剂,带有大量的负电荷,当其与蛋白质结合时,所带的负电荷大大超过天然蛋白质原有的负电荷,因而可消除或掩盖不同种类蛋白质间原有电荷的差异,使所有的SDS一蛋白质复合体电泳时都以同样的电荷密度向正极移动。SDS凝胶电泳可看成是以电场为驱动力的凝胶过滤。SDS可使蛋白质的氢键、疏水键打开,引起蛋白构象改变,使SDS-蛋白质复合体在水溶液中形状近似长椭圆棒,不同SDS-蛋白质复合物的短轴相同,长轴则与蛋白质的相对分子质量成正比。因此,SDS-蛋白质复合物在电泳中的迁移率不再受蛋白质原有电荷和形状的影响,而只与蛋白质的相对分子质量有关。 (2)方法。在分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液、电极缓冲液中均加入一定量的SDS,在蛋白质样品中加入SDS样品缓冲液,100℃水浴加热3分钟使蛋白质变性,然后进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (3)应用。测定未知蛋白质的相对分子质量时,可选用一组已知相对分子质量的标准蛋白质及适宜的凝胶浓度,同时进行SDS-PAGE,则可根据已知相对分子质量的蛋白质的电泳迁移率和相对分子质量的对数作出标准曲线,再根据未知蛋白质的电泳迁移率求得相对分子质量。SDS-PAGE还可以用于蛋白质混合组分的分离和亚组分的分析,当蛋白质经SDS-PAGE分离后,设法将各种蛋白质从凝胶上洗脱下来,除去SDS,还可进行氨基酸测序、酶解图谱及抗原分析等方面的研究。
【答案解析】